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另外,由PCR技术与其他技术相结合又衍生出一系列相关技术,如反转录PCR(RT-PCR)、免疫PCR、抗原捕获PCR、毛细管PCR、套式PCR(NestedPCR)、重组PCR、多重PCR、荧光定量PCR等。
(2)核酸探针技术:
核酸探针又称为基因探针或核酸分子杂交技术。
该技术有三大组成部分:
待检核酸(模板),固相载体(NC硝酸纤维膜或尼龙膜),同位素、酶或荧光材料等标记的已知核酸片段(探针)。
该方法敏感性高,检测一个单基因仅需10?拷贝,能检测出低至10ˉ13gDNA,用单抗方法则至少需要10u0027抗原分子;特异性强,可以从混合标本中正确鉴定出目的病原微生物,而且可从一个标本中同时检测几种核酸。
核酸探针诊断技术可用于所有病原体的特异诊断及分类鉴定;在混有大量杂菌或混合感染物中直接检出主要致病原,包括难以在体外培养的病原,检出隐性感染的动物,动物产品或食品的卫生检验。
但该技术由于操作复杂、耗时较长,特别是缺少商品化探针等原因,故仅用于科学研究,还从未在兽医临床诊断实践工作中应用过,因此无法与PCR技术相提并论。
(3)DNA芯片技术:
DNA芯片又称为基因芯片(genechip)、微阵列(microarray),属于生物芯片的一种。
根据微阵列上探针不同,DNA芯片又分为寡核苷酸芯片和cDNA芯片。
其技术和设备日趋成熟,在医学、遗传学等许多领域已有产品供应,例如筛选检测HIV蛋白酶基因和反转录酶基因突变的DNA芯片,某些癌症基因的诊断芯片,大肠杆菌、酵母的蛋白表达谱芯片,金黄色葡萄球菌、白色念珠菌DNA芯片等。
国外已有用于动物传染病诊断的报道,国内目前仍处于技术移植、探索和研究阶段,关键是试剂的商品化问题。
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